大鼠转化蛋白RhoA-GTP（RhoA-GTP)ELISA试剂盒
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被该指标抗体的微孔中,依次加入标本,标准品、HRP标i的检测抗体。经过洗涤后用底物TMB显色。TMB在过气化物酶的催化下转化成蓝色并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
大鼠转化蛋白RhoA-GTP（RhoA-GTP)ELISA试剂盒组成

名称	96孔配置	48孔配置	备注
微孔酶标板	12孔*8条	12孔*4条	无
标准品	0.3ml*6管	0.3ml*6管	无
样本稀释液	6ml	3ml	无
检测抗体-HRP	10ml	5ml	无
20x洗涤缓冲液	25ml	15ml	按说明书稀释
底物A	6ml	3ml	无
底物B	6ml	3ml	无
终止液	6ml	3ml	无
封板膜	2张	2张	无
说明书	1份	1份	无
自封袋	1个	1个	无

 大鼠转化蛋白RhoA-GTP（RhoA-GTP)ELISA试剂盒   试剂的准备

20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板方法
1.手工洗板:甩尽孔内液体,每孔,加满洗涤液,静置1min后用尽孔内液体,在吸水纸上拍,如此洗板5次。
2.自动洗板机:每孔注入洗液350uL,漫泡1min,洗板5次。
自备物品
1.酶标仪(450nm)
2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、 20-200uL、 200-1000uL
3.37“C恒温箱

大鼠转化蛋白RhoA-GTP（RhoA-GTP)ELISA试剂盒操作步骤
1.从室温平衡20min后的袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4C。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品504L;
3.样本孔先加待测样本10uL,再加样本稀释液40uL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根化物酶(HRP)标记的检测抗体1004L,用封板膜封住反应,37“C水浴锅或恒温箱温育60min。
5,弃去液体,吸水纸上拍工每,加满洗涤液 静置1min,用去洗涤液,吸水纸上拍如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板.
6.每孔加入底物A、B各50uL,37“C避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50L,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
样品收集、处理及保存方法
1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离
2.血浆EDTA、柠檬酸盐或肝毒抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水搞碎。3000转离心10分钟取上清。
5.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装冻存于-20C,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
结果判断
绘制标准典线:在Exge工作表中,以标准品浓度作播少标,对应OD值作纵坐标 绘制出标准品线性回归典线 按曲线方程计算各样本浓度值。
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