ELISA实验中血清样本的分离保存及注意事项

一、血清的分离过程

1.  采血：首先，需要用适当的采血管（如凝胶促凝管或普通促凝管）采集志愿者或患者的全血。避免使用抗凝管，因为抗凝剂会影响血清的分离。

2.  静置：采集完成后，将采血管在37℃温箱中静置30分钟，待xue块凝集。血液中的红细胞和白细胞会聚集在一起形成xue块。

3.  离心：将静置后的采血管在离心机上离心。通常离心转速为1000g（具体转速需根据机型调整），离心时间为15分钟。离心过程中，xue块会被甩到离心管底部，而血清则位于xue块上方。

4.  分离血清：用移液器小心地取出离心管中的血清，尽量避免触及xue块。将血清转移到新的无菌容器中，即可进行后续实验或其他操作。

5.  通过以上步骤，可以有效地将血清从全血中分离出来。需要注意的是，在分离血清的过程中，要尽量避免细菌污染，以保证实验结果的准确性。

二、血清样本的保存

1.  能够应用ELISA 实验的样本种类很多，有血清，血浆，细胞上清，细胞裂解液，尿液，关节滑液，脑脊液，肺泡灌洗液，各种组织的组织匀浆﹔采集和处理的方式都不相同。

2.  ELISA试剂盒样本的收集及血清别离中要留意尽量防止细菌污染，一则细菌的生长，其所排泄的一些酶也许会对抗原抗体等蛋白发生分化效果。样本的长期保留，应在-70C以下。

3.  ELISA试剂盒血清标本是以无菌操作别离，则能够在2~8C下保留一周，有菌操作，则主张冰冻保留。要留意防止呈现严峻溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有相似过氧化物的活性。在以HRP为符号酶的ELISA测定中，如血清标本中止呈现严峻溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有相似过氧化物的活性.在以HRP为符号酶血红蛋白浓度较高，则其就很简单在温育过程中吸附于固相，然后与后边加入的HRP底物反应显色.

4.  冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的剪切将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果。此外，冻融标本的混匀亦应注意，不要进行剧烈振荡，反复颠倒混匀即可。

5.  在保存标本中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检测.

三、血液样本的放置时间对其检验结果的影响

1.  血糖（GLU）水平：应在采血后4小时内测定，因为随着时间的延长，血糖水平可能会因血细胞的糖酵解作用而降低。

2.  血清钾和血清氯水平：血清钾在放置1小时后与即刻相比会明显升高，而血清氯在放置5小时后会明显下降。这表明血清电解质浓度会随时间而改变，因此应在允许的留置时间内尽快送检。

3.  血脂和脂蛋白：胆固醇等血脂成分在长时间贮存中可能会因脂蛋白颗粒结构的改变或裂解而受到影响，从而影响检测结果的准确性。

4.  血清蛋白和酶活性：总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、谷氨酰转肽酶（GGT）等指标在血液样本长时间放置后，其测定结果往往会偏高。而尿素氮（BUN）和总胆红素（TBIL）则可能偏低。

5.  乳酸浓度：在室温下放置15分钟后，乳酸浓度会明显升高。在4℃条件下，乳酸浓度升高不明显，但放置1小时后差异则有显著意义。因此，采血后应立即检测，或尽可能在规定时间内完成送检。

6.  多项目检测：如果要检测多个项目，最好分别采集不同的血液样本，以防止样本间的污染。如果必须使用同一份样本，则应注意检测的顺序，例如，*行PCR检测再进行生化检测，以避免生化检测后的样本污染影响PCR检测结果。

7.  综上所述，血液样本的放置时间会对其检验结果产生多方面的影响。为了确保检测结果的准确性和可靠性，应在规定的时间内完成采血、送检和检测工作。同时，还应考虑实验室的温度条件对样本的影响，并采取适当的措施以确保样本质量。